Barwienie hematoksyliną i eozyną, barwienie przeglądowe, zwyczajowo barwienie zwykłe – najpopularniejsza metoda barwienia preparatów histologicznych, rutynowo stosowana w pracowniach histologicznych i histopatologicznych.
Barwienie polega na potraktowaniu preparatu (skrawka odparafinowanego lub mrożonego) hematoksyliną ałunowąBarwnik ten w rzeczywistości nie jest hematoksyliną, lecz produktem jej odwodornienia – hemateiną – powszechnie błędnie określanym nazwą hematoksyliny., która wybarwia zasadochłonne struktury na fioletowo, spłukaniu preparatu wodą i wybarwienie eozyną Y (żółtawą) wybarwiającą kwasochłonne struktury na różowo.
Procedura barwienia Procedura barwienia odparafinowanych lub mrożeniowych skrawków nałożonych na szkiełka podstawowe składa się z następujących etapów: kąpiel w kuwecie z hematoksyliną ałunową przez 7–10 minut kąpiel w kuwecie z wodą destylowaną płukanie bieżącą wodą przez 15 minut kąpiel w kuwecie z wodą destylowaną kąpiel w kuwecie z 1% eozyną Y z dodatkiem jednej kropli kwasu octowegoKwas octowy zapobiega zobojętnieniu barwnika podczas płukania i tym samym utracie jego powinowactwa do struktur zasadowych. kąpiel w kuwecie z wodą destylowaną.
Fizykochemiczny opis procesu barwienia Granatowa hematoksylina ałunowa jest substancją zasadową, zaś różowa eozyna Y jest słabym kwasem. Jon hematoksyliny wykazuje ładunek dodatni, zaś jon eozynowy ujemny, w konsekwencji czego cząsteczki te przyłączają się do struktur o przeciwnych ładunkach: hematoksylina do grup fosforanowych DNA jądra komórkowego, zaś eozyna do białek cytoplazmatycznych.
Uwagi
Przypisy
Bibliografia
Kategoria:Barwienia