Alexa Fluor è una famiglia di coloranti fluorescenti inventata da Molecular Probes, attualmente azienda sussidiaria di Thermo Fisher Scientific a cui è stata venduta col nome di Invitrogen. I coloranti Alexa Fluor sono frequentemente adoperati come marcatori cellulari e tissutali per la microscopia a fluorescenza e per la biologia cellulare. I coloranti Alexa Fluor possono essere coniugati direttamente ad anticorpi primari e secondari così da amplificarne segnale e sensibilità, ma anche ad altre biomolecole.
Gli spettri di emissione ed eccitazione della serie Alexa Fluor coprono l'intero spettro del visibile e parte dell'infrarosso. I membri specifici di questa famiglia sono riconosciuti tramite un numero che si riferisce in maniera approssimativa al picco massimo di eccitazione in nanometri.
Storia Richard e Rosaria Haugland, i fondatori di Molecular Probes, sono molto conosciuti in chimica e biologia per le loro ricerche sui coloranti fluorescenti e sulle loro applicazioni in campo biologico; infatti quando Molecular Probes è stata fondata, questo tipo di prodotti non era in nessun modo disponibile sul mercato. Dai laboratori di Molecular Probes sono nati numerosi coloranti attualmente estremamente noti ed adoperati, quali: Texas Red, Cascade Blue, Oregon Green, Marina Blue e la serie di Alexa Fluor. Presumibilmente quest'ultima rappresenta il colorante maggiormente noto, è stato sviluppato per migliorare varie problematiche insorte sui coloranti precedentemente prodotti.
Chimicamente i coloranti Alexa Fluor sono sintetizzati mediante solfonazione e modificazioni addizionali su dei coloranti precedentemente prodotti; in particolare erano sfruttate le famiglie della cumarina, rodamina, xantene (tra cui si annovera la fluoresceina) e cianine. La solfonazione genera una carica negativa sugli Alexa Fluor rendendoli più idrofilici dei precursori, mentre le modificazioni addizionali permettono un miglioramento delle prestazioni in altri campi. Per esempio Alexa Fluor 488, una forma solfonata e modificata della fluoresceina, è stata costruita per risolvere i tipici problemi del foto-bleaching (perdita progressiva della fluorescenza nel tempo) e della dipendenza dal pH per la nascita del segnale, comuni nei coloranti standard come il FITC.
Il nome Alexa Fluor nasce a partire da Alex Haugland, figlio di Richard e Rosaria Haugland. Molecular Probes è stata acquistata nel 2003 da Invitrogen, il quale ha fatto sì che la famiglia Alexa Fluor fosse ampliata aggiungendo nuovi coloranti che riempissero i vuoti all'interno degli spettri adoperabili. Nel 2008 Invitrogen si fuse con Applied Biosystems e prese il nome di Life Technologies portando con sé anche la famiglia Alexa Fluor. Nel 2014 Life Technology fu acquistata da Thermo Fisher Scientific, il quale fece rinascere il brand Invitrogen e riportò sotto di esso il brevetto delle Alexa Fluor.
Coloranti NomeColore†Assorbimento
(nm)Emissione
(nm)MM (g/mol)ε (cm−1M−1) Resa Quantica Alexa Fluor 350 Blu 346 442 410 19,000 -— 405 Viola 401 421 1028 35,000 -— 430Verde 434 541 702 15,000 -— 488 Ciano-verde 495 519 643 73,000 0.92— 500 Verde 502 525 700 71,000 -— 514Verde 517 542 714 80,000 -— 532Verde 532 554 721 81,000 0.61— 546 Giallo 556 573 1079 112,000 0.79— 555 Giallo-Verde 555 565 ~1250 155,000 0.1— 568Arancione 578 603 792 88,000 0.69— 594 Arancione-Rosso 590 617 820 92,000 0.66— 610Rosso 612 628 1172 144,000 -— 633Rosso-lontano 632 647 ~1200 159,000 -— 635Rosso-lontano 633 647 - 140,000 -— 647Rosso-lontano 650 665 1155.06Supporting Information; Esteban, Fink, et al. 270,000 0.33— 660Infrarosso-vicino 663 690 ~1100 132,000 0.37— 680Infrarosso-vicino 679 702 ~1150 183,000 0.36— 700Infrarosso-vicino 702 723 ~1400 205,000 0.25— 750Infrarosso-vicino 749 775 ~1300 290,000 0.12— 790Infrarosso-vicino 782 805 - 260,000 - † = Colore approssimativo dello spettro di emissione ε = coefficiente di estinzione molare
Confronto con altri coloranti Sebbene i coefficienti di estinzione molare sono noti (vedi la tabella), non lo sono le rese quantiche e i tempi di vita. Il paragone con altri coloranti va effettuato sulla base delle condizioni (ovvero della tecnica) necessaria per l'utilizzo e le prestazioni (segnale, rumore di fondo, stabilità).
La serie Alexa Fluor è meno sensibile al pH ed è più fotostabile rispetto ai coloranti precursori (fluoresceina, rodamina, ecc.) da cui viene sintetizzata. Confronti sulla base della luminosità sono sempre favorevoli agli Alexa Fluor. Non è facile effettuare dei paragoni con coloranti totalmente distinti poiché cambiano le condizioni (la tecnica) usate. Terzi hanno comparato Alexa Fluor 647 con Cy5 considerando che i due possiedono una simile lunghezza d'onda quando coniugati col DNA.
Note
Voci correlate Molecular Probes Fluorescenza Microscopio a fluorescenza
Categoria:Coloranti