Проводка — процесс дегидратации (обезвоживания) и обезжиривания фрагмента ткани и пропитки его парафином. Другими словами, жидкостная и жировая составляющая ткани замещается парафином. Для приготовления тонких гистологических срезов объекты уплотняют с помощью заливки в парафин, а поскольку он в воде не растворяется, кусочки фиксированной ткани предварительно необходимо обезводить.

Значение проводки Проводка обеспечивает уплотнение ткани, которое необходимо для получения срезов (если ткань будет излишне мягкой, то при микротомировании она будет «сминаться», образуя складки, разрывы и другие артефакты, делающие её непригодной к изучению). Является необходимым этапом подготовки микроскопического препарата и в большинстве случаев — наиболее долгим.Проводка осуществляется путем погружения и инкубацией образцов тканей в спиртах и органических растворителях, в результате чего происходит замещение полярных компонентов ткани (воды) на менее полярные спирты и неполярные углеводороды. Дальнейшее замещение углеводородов на парафин позволяет обеспечить уплотнение образца, что делает возможным получить достаточно тонкие срезы (4-6 мкм) при микротомировании.

Методики проводки Дегидратация и обезжиривание Для обезвоживания обычно служит набор (или батарея) спиртов повышающейся концентрации. Проводка с этиловым спиртом и ксилолом Проводка с этиловым спиртом и хлороформом Проводка с изопропанолом (чаще используют модифицированный изопропиловый спирт с присадками, например, тритоном, обеспечивающим лучшее проникновение реагента в ткани). Проводка с использованием толуола, бензола, ацетона и другие кустарные варианты. В настоящее время эти реагенты ввиду их высокой токсичности для персонала заменяются сочетанием 100% изопропанола и минерального масла. Важной технологической особенностью использования изопропанола является необходимость существенного (до 1,5 раз) увеличение продолжительности проводки материала.

Методики обезвоживания отличаются продолжительностью. Значительно ускоряет процесс нагревание спиртов до 37-40 градусов С, кроме того увеличиваются обезжиривающие свойства спиртов, что важно при проводке богатых жирами тканей. Процессы диффузии можно усилить постоянным перемешиванием растворов, например с помощью магнитной мешалки.

Пропитка Пропитка чистым парафином (в настоящее время не используется, так как парафин застывает с образованием кристаллов и при резке крошится) Пропитка парафиновой средой (парафиновой средой называют парафин с присадками — пчелиный, рисовый воск и др.). Может изготавливаться как вручную, путём многократного расплавления и перемешивания до достижения гомогенной массы, так и в заводских условиях. Пропитка целлоидином. Метод считается относительно устаревшим, так как пригоден не для всех типов окраски (в том числе иммуногистохимии (ИГХ). Нельзя превышать температуру парафина выше 62°С, так как некоторые готовые парафиновые смеси содержат полимеры, которые разрушаются от высокой температуры. Для получения наилучших результатов при проводке и заливке материала необходимо использовать парафин высокого качества. В настоящее время предлагается множество марок специализированного гранулированного парафина для гистологии. Основные качественные характеристики – температура плавления 56 градусов С, гомогенность , пластичность.

Проводка может производиться как вручную, так и при помощи автоматических процессоров карусельного или вакуумного типов, обеспечивающих смену растворов, необходимую температуру и давление для наилучшей пропитки тканей реагентами.

Проводка вручную Традиционно проводку осуществляли вручную, и в превалирующем количестве российских гистологических лабораторий метод используется до сих пор. Имеет ряд значительных недостатков: трудоемкость, длительность (до четырёх суток), испарение реагентов в воздух лаборатории (что небезопасно для сотрудников лаборатории, так как ксилолы образуют взрывоопасные паровоздушные смеси, вызывают острые и хронические поражения кроветворных органов, при контакте с кожей — дерматиты), а также нестабильное качество получаемой ткани, зависящее от человеческого фактора, а именно действий лаборанта. Кроме того, расход реагентов при проводке вручную намного выше, чем при автоматической, — как за счет испарения, так и за счет меньшей эффективности.

Типичная схема проводки ручным методом: +1.Проточная фильтровальная вода30 мин2.Изопропанол 160 мин3.Изопропанол 260 мин4.Изопропанол 360 мин5.Изопропанол 460 мин6.Изопропанол 590 мин7.Изопропанол: минеральное масло - 5:190 мин8.Изопропанол: минеральное масло - 2:190 мин9.Минеральное масло360 мин10.Парафин 160 мин11.Парафин 260 мин12.Парафин 360 мин

Автоматическая проводка Основная статья: Гистопроцессор

Существуют аппараты — гистопроцессоры, имеющие закрытый контур и таким образом не допускающие испарений в воздух лаборатории. Путём использования гистопроцессоров также можно значительно уменьшить время проводки по сравнению с ручным методом (до одного часа при использовании гистопроцессора Donatello Fast) за счет применения вакуум-инфильтрационной методики.

Типичная схема проводки на гистопроцессоре для образцов не более 4 мм: +170% этанол15 мин290% этанол15 мин3100% этанол15 мин4100% этанол15 мин5100% этанол30 мин6100% этанол45 мин7Ксилол20 мин8Ксилол20 мин9Ксилол45 мин10Парафин30 мин11Парафин30 мин12Парафин45 мин

Примечания

Категория:Гистология