Test neutralizacije jedna je veoma specifična, ali komplikovana, skupa i tehnički zahtevna metoda, u serologiji, koja je zbog navedenih nedostataka uglavnom zamenjena savremenijim tehnikama. Zasnovan je na saznanju da virus-specifična antitela, ukoliko su prisutna u serumu, neutrališu virus, tako da on ne može da raste u kulturi.Storch GA. Diagnostic Virology. In: Knipe DM, Howley PM. Fields Virology. 4th ed. Lippincott Williams & Wilkins, 2001: 493-531. Pošto se u reakciji koriste dvostruka serijska razblaženja seruma ili izolovanog virusa, test je kvantitativan i njime se moze odrediti količina neutrališućih antitela ili izolovanog virusa., 2009.Murray PR, Witebsky FG. The Clinician and the Microbiology Laboratory. In: Mandell, Douglas and Bennett´s principles and practice of infectious diseases, eds. Gerald L. Mandell, John E. Bennett, Raphael Dolin. 7th ed., Churchill Livingstone Elsevier, 2010: 233-65 Opšte informacije Pošto su virusi primarno intracelularni (unutarčelijski) paraziti, oni se ne mogu izolovati na veštačkim hranljivim podlogama, već samo u živim ćelijama domaćina.Krstić Lj, Medicinska virusologija, drugo izdanje, 2000. Kulture ćelija su veoma osetljive, pa se najčešće koriste za otkrivanje i kultivisanje virusa.Winn W, Allen S, Janda W, Koneman E, Procop G, Schreckenberger P, Woods G. Koneman's Color Atlas and Textbook of Diagnostic Microbiology. 6th ed. Lippincott Williams & Wilkins, 2006. Pored kultivisanja u ćelijskim kulturama, animalni virusi se kultivišu i u eksperimentalnim životinjama (ređe se koristi) i u embrionisanom kokošijem jajetu (za proizvodnju virusnih antigena i vakcina).Nester EW, Anderson DG, Roberts CE, Nester MT. Microbiology a human perspective. 5th ed. McGraw-Hill Companies, New York 2007V. Presečki i sur: Virologija, Medicinska naklada, Zagreb, 2002
Kod animalnih virusa, kulture ćelija su zapravo razmnožene životinjske ćelije u veštačkoj podlozi. Kada se u ćelijsku kulturu unese materijal koji sadrži virus, virus će inficirati ćelije i formirati plake – vidljiva mesta, prozirne zone, unutar ćelijske kulture gde je virus lizirao (razorio) ćeliju.Arsenović Ranin N, Stojić Vukanić Z, Bufan B. Priručnik za praktičnu nastavu iz imunologije i imunohemije, Farmaceutski fakultet u Beogradu 2007.
Virusna infekcija može dovesti i do drugih morfoloških promena (oblika i građe) kao što su gigantske ćelije, grupe ćelija u gomilice itd. Ove promene ćelijske kulture nazivaju se – citopatogeni efekat (akronim CPE). CPE se može posmatrati primenom običnog svetlosnog mikroskopa..
Namena Test neutralizacije se koristi za detekciju specifičnih neutrališućih antitela ili za identifikaciju izolovanog virusa..Black JG. Microbiology. 7th ed. John Wiley & Sons, INC 2008.Stankov S. Razvoj i značaj komparativne sekvencijske analize u medicinskoj virusologiji. Med Pregl 2006; LIX (3-4): 138-42. Način izvođenja мини|Test neutralizacije Test neutralizacije se može izvoditi na:Tortora GJ, Funke BR,Case CL. Microbiology, an introduction. 8th ed. San Francisko CA, 2004. kulturi ćelija, pilećem embrionu, eksperimentalnim zivotinjama.Arsenović Ranin N, Stojić Vukanić Z, Bufan B. Priručnik za praktičnu nastavu iz imunologije i imunohemije, Farmaceutski fakultet u Beogradu 2007. Neutralisana antitela se vezuju za površinske antigene koji učestvuju u pripajanju virusa na receptor osjetljive ćelije čime se neutrališe infektivnost virusa.
Kada se test neutralizacije koristi za dokazivanje neutrališućih antitela mešaju se serijska razblaženja inaktivisanog ispitivanog seruma i konstantna količina poznatog virusa.Mlinarić-Galinović, G., Ramljak-Šešo, M. i sur.: Specijalna medicinska mikrobiologija i parasitologija, Merkur A. B. D., Zagreb, 2003
Kada se test neutralizacije koristi za identifikaciju izolovanog virusa uzimaju se jednake količine poznatog dijagnostičkog seruma i mešaju sa dvostrukim serijskim razređenjima izolovanog virusa.S. Kalenić, E. Mlinarić-Missoni : Medicinska bakteriologija i mikologija., Merkur A. B. D., Zagreb, 2001.
U inokulisanoj kulturi ćelija posmatra se citopatogeni efekt (CPE). Titar neutrališućih antitela je najveće razblaženje seruma koje spečava citopatogeni efekt.
Reference
Spoljašnje veze Medicinska bakteriologija i virologija (2)
Категорија:Медицинска вирусологија Категорија:Медицинске анализе