A cloranfenicol acetiltransferase (ou CAT) é un encima bacteriano () que detoxifica o antibiótico cloranfenicol e é responsable da resistencia ao cloranfenicol en bacterias. Este encima une covalentemente un grupo acetilo procedente do acetil-CoA ao cloranfenicol, o cal impide que o cloranfenicol se una aos ribosomas. Un residuo de histidina, localizado na sección C-terminal do encima, xoga un papel central no seu mecanismo catalítico.
Determinouse a estrutura cristalina do encima tipo III de Escherichia coli co cloranfenicol unido. A CAT é un trímero de subunidades idénticas (monómero Mr 25.000) e a estrutura trímera está estabilizada por varias pontes de hidróxeno, algunhas das cales orixínan a extensión dunha folla beta na interface das subunidades. O cloranfenicol únese nun peto profundo localizado no límite entre as subunidades adxacentes do trímero, para que a maioría dos residuos que forman o peto de unión pertenzan a unha subunidade, mentres que a histidina cataliticamente esencial pertence á subunidade adxacente. A His195 está situada apropiadamente para actuar como catalizador básico xeral na reacción, e a estabilización tautomérica necesaria proporciónaa unha interacción pouco común cun oxíxeno do carbonilo da cadea principal.
Aplicación A CAT utilízase como sistema reporteiro para medir o nivel dun promotor ou da súa expresión específica de tecido en experimentos de ADN recombinante. O ensaio da CAT supón monitorizar a acetilación de cloranfenicol etiquetado radioactivamente na placa TLC; a actividade da CAT determínase buscando a forma acetilada do cloranfenicol, a cal ten unha velocidade de migración significativamente maior comparada coa forma non acetilada.
Notas
Categoría:Transferases