W przypadku tytoniu suszonego gorącym powietrzem starzenie naturalne może trwać 2–3 lata i przebiegać w temperaturze około 20–30 °C oraz przy wilgotności względnej 65–75%.
W badaniach mikrobiologicznych wykazano, że czas fermentacji silnie wpływa na skład i funkcje społeczności bakteryjnych obecnych na powierzchni liści. W doświadczeniu obejmującym próbki po 0, 3, 6, 9 i 12 miesiącach fermentacji czas procesu miał większy wpływ na różnorodność i skład bakterii niż umiejscowienie liścia na roślinie lub miejsce prowadzenia fermentacji.
W części badań analizuje się również możliwość kontrolowanego użycia wybranych szczepów mikroorganizmów w celu przyspieszania rozkładu określonych składników liści i modyfikowania profilu aromatycznego. Tego typu podejścia mają charakter technologiczny i badawczy, a ich skuteczność zależy od rodzaju surowca, warunków fermentacji i składu mikrobioty obecnej na liściach.
Przemiany chemiczne i mikrobiologiczne Podczas fermentacji i starzenia zachodzą przemiany węglowodanów, białek, związków azotowych, polifenoli, terpenoidów i innych składników liści. W przemianach tych uczestniczą reakcje utleniania, aktywność enzymatyczna oraz metabolizm mikroorganizmów.