Ektonukleozidna trifosfat-difosfohidrolaza 5 je enzim koji je kod ljudi kodiran genom ENTPD5.
Fluorescentnom in situ hibridizacijom i analizom veza, Chadwick et al. (1998) locirali su gen MNTPaze na mišjem hromosomu 12, u regiji koja pokazuje homologiju sinteze sa ljudskim hromozomom 14q. Analizom hibridnih ploča hibridnih i somatskih zračenih ćelija, Chadwick i Frischauf (1998) potvrdili su da se CD39L4 nalazi na ljudskom hromosomu 14, pozicija q24. Zaključili su da je CD39L4 ljudski homolog MNTPaze.Chadwick, B. P., Frischauf, A.-M. The CD39-like gene family: identification of three new human members (CD39L2, CD39L3, and CD39L4), their murine homologues, and a member of the gene family from Drosophila melanogaster. Genomics 50: 357-367, 1998. PubMed: 9676430
ENTPD5 je sličan nukleotidazama E-tipa (NTPaze)/ekto-ATPaza/apirazama. NTPaze, poput CD39, posreduju katabolizam vanćelijskih nukleotida. ENTPD5 sadrži četiri konzrrvirane regije apiraza, što je karakteristično za NTPaze.
Aminokiselinska sekvenca
Dužina polipeptidnog lanca je 428 aminokiselina, a molekulska težina 47.517 Da..
1020304050 MATSWGTVFFMLVVSCVCSAVSHRNQQTWFEGIFLSSMCPINVSASTLYG IMFDAGSTGTRIHVYTFVQKMPGQLPILEGEVFDSVKPGLSAFVDQPKQG AETVQGLLEVAKDSIPRSHWKKTPVVLKATAGLRLLPEHKAKALLFEVKE IFRKSPFLVPKGSVSIMDGSDEGILAWVTVNFLTGQLHGHRQETVGTLDL GGASTQITFLPQFEKTLEQTPRGYLTSFEMFNSTYKLYTHSYLGFGLKAA RLATLGALETEGTDGHTFRSACLPRWLEAEWIFGGVKYQYGGNQEGEVGF EPCYAEVLRVVRGKLHQPEEVQRGSFYAFSYYYDRAVDTDMIDYEKGGIL KVEDFERKAREVCDNLENFTSGSPFLCMDLSYITALLKDGFGFADSTVLQ LTKKVNNIETGWALGATFHLLQSLGISH Simboli
C: Cistein D: Asparaginska kiselina E: Glutaminska kiselina F: Fenilalanin G: Glicin H: Histidin I: Izoleucin K: Lizin L: Leucin M: Metionin N: Asparagin P: Prolin Q: Glutamin R: Arginin S: Serin T: Treonin V: Valin W: Triptofan Y: Tirozin
Kloniranje i ekspresija Nukleozidne trifosfataze (NTPaze) su dvovalentni transmembranski glikoproteini koji zavise od kationa i hidroliziraju vanćelijske nukleozidne tri– i/ili difosfate. NTPaze karakterizira prisustvo četiri motiva poznata kao regije konzervirane apiraze (ACR). Chadwick et al. (1998) identificirali su cDNK koje kodiraju mišju NTPazu, simbolizirajući MNTPazu. Pretražujući EST bazu podataka za sekvence slične onim MNTPaze, Chadwick i Frischauf (1998) identificirali su cDNK koje odgovaraju dvama ljudskim genimaa, CD39L2 i CD39L4. Kodirajuće regije mišjeg i ljudskog gena CD39L4 dijele 88% identiteta nukleotidne sekvence. Predviđeni protein CD39L4 od 428 aminokiselina sadrži sva četiri ACR-a, jedan N-terminalni transmembranski segment i veliki vanćelijski C-terminalni domen. Northern blot analiza otkrila je da je CD39L4 eksprimiran kao iRNK od 4,8 kb u svim testiranim tkivima. Nekoliko manjih traka takođe je primijećeno u tkivima sa najjačom ekspresijom CD39L4.Chadwick, B. P., Williamson, J., Sheer, D., Frischauf, A.-M. cDNA cloning and chromosomal mapping of a mouse gene with homology to NTPases. Mammalian Genome 9: 162-164, 1998. PubMed: 9457681
Fang et al (2010) pokazali su da je Entpd5 označen fluorescencijom lokaliziran markerom endoplazmatskog retikuluma (ER) u mišjim embrionskim fibroblastima(MEF).
Funkcija gena PCR analizom cDNK biblioteka, Mulero et al. (1999) otkrili su CD39L4 samo u makrofagima. Funkcionalnom i Western blot analizom utvrđeno je da je aktivnost ADPaze i nukleotid-difosfataze izlučenog proteina od 51 kD pojačana prisustvom dvovalentnih kationa. Liječenje glikozidazom ili tunikamicinom (Mulero et al., 2000) smanjilo je veličinu proteina na predviđenih 46 kD i smanjilo količinu sekrecije; za razliku od CD39L3, međutim, nije umanjio enzimsku aktivnost.Mulero, J. J., Yeung, G., Nelken, S. T., Bright, J. M., McGowan, D. W., Ford, J. E. Biochemical characterization of CD39L4. Biochemistry 39: 12924-12928, 2000. PubMed: 11041857Mulero, J. J., Yeung, G., Nelken, S. T., Ford, J. E. CD39-L4 is a secreted human apyrase, specific for the hydrolysis of nucleoside diphosphates. J. Biol. Chem. 274: 20064-20067, 1999. PubMed: 10400613 Fang et al. (2010) pokazali su da in vitro translatirani ENTPD5 hidrolizira UDP i GDP, ali ne i druge nukleotide. Delecija Ptena u MEF rezultira aktivacijom puta PI3 kinaze / Akt, koji promovira rast i preživljavanje ćelija, uz istovremeno povećanje translacije proteina. Pokazali su da su ekspresija Entpd5 i hidroliza ATP značajno povišeni u Pten –/– MEF. Masenom spektrometrijskom analizom identificirani su ENTPD5, UMP/CMP kinaza-1 (CMPK1) i adenilat-kinaza-1 (AK1) kao komponente ciklusa hidrolize ATP u HeLa ćelijama. Unutar ovog ciklusa, ENTPD5 je pružio kritične UMP ili GMP kofaktore za hidrolizu ATP u AMP i nedostatak bilo kojeg od tri enzima koji su ugrozili hidrolizu ATP. Nokdaun Entpd5 u Pten –/– MEF povećao je ekspresiju markera ER stresa, smanjio N-glikozilaciju proteina i smanjio proizvodnju laktata. Western blot, imunohistokemijske i analize mikromreža pokazale su da je regulacija ENTPD5 korelirala s aktivacijom AKT-a u ljudskim ćelijskim linijama karcinoma prostate i primarnim uzorcima tumora prostate. Nokdaun ENTPD5 u LNCaP ćelijaa kamrcinoma prostate smanjio je rast tumora kod golih miševa. Zaključili su da ENTPD5 ima kritičnu ulogu u N-glikozilaciji i doprinosi Warburgovom efektu, tj. povišenoj proizvodnji laktata u aerobnim uvjetima, u ćelijama tumora.Fang, M., Shen, Z., Huang, S., Zhao, L., Chen, S., Mak, T. W., Wang, X. The ER UDPase ENTPD5 promotes protein N-glycosylation, the Warburg effect, and proliferation in the PTEN pathway. Cell 143: 711-724, 2010. PubMed: 21074248 Reference
Dopunska literatura
Kategorija:Geni na hromosomu 14 Kategorija:Ljudski proteini Kategorija:Proteomika