MIS18-vezujući protein 1 je protein koji je kod ljudi kodiran genom MIS18BP1. Gen je poznat i kao LKNL2, M18BP1, C14orf106 i HSA242977. MIS18A (618137), MIS18B (OIP5; 606020) i MIS18BP1 čine kompleks MIS18. MIS18 posreduje u transportu novosintetiziranog centromernog proteina A (CENPA) u centromerama. (Fujita et al., 2007).
Gross (2018) locirao je gen MIS18BP1 na hromosomskoj poziciji 14q21.2, na osnovu poravnavanja sekvence MIS18BP1 (GenBank BC051885) sa genomskom sekvencom (GRCh38).Gross, M. B. Personal Communication. Baltimore, Md. 10/22018.
Aminokiselinska sekvenca
Dužina polipeptidnog lanca je 1.132 aminokiseline, a molekulska težina 129.085 Da..
1020304050 MIATPLKHSRIYLPPEASSQRRNLPMDAIFFDSIPSGTLTPVKDLVKYQN SSLKLNDHKKNQFLKMTTFNNKNIFQSTMLTEATTSNSSLDISAIKPNKD GLKNKANYESPGKIFLRMKEKVLRDKQEQPSRNSSLLEPQKSGNNETFTP NRVEKKKLQHTYLCEEKENNKSFQSDDSSLRASVQGVPLESSNNDIFLPV KQKIQCQQEKKAPLHNLTYELPTLNQEQENFLAVEARNKTLTRAQLAKQI FHSKESIVATTKSKKDTFVLESVDSADEQFQNTNAETLSTNCIPIKNGSL LMVSDSERTTEGTSQQKVKEGNGKTVPGETGLPGSMKDTCKIVLATPRLH ITIPRRSKRNISKLSPPRIFQTVTNGLKKNQVVQLQEWMIKSINNNTAIC VEGKLIDVTNIYWHSNVIIERIEHNKLRTISGNVYILKGMIDQISMKEAG YPNYLIRKFMFGFPENWKEHIDNFLEQLRAGEKNREKTKQKQKTGRSVRD IRKSMKNDARENQTDTAQRATTTYDFDCDNLELKSNKHSESPGATELNMC HSNCQNKPTLRFPDDQVNNTIQNGGGDDLSNQELIGKKEYKMSSKKLKIG ERTNERIIKSQKQETTEELDVSIDILTSREQFFSDEERKYMAINQKKAYI LVTPLKSRKVIEQRCMRYNLSAGTIKAVTDFVIPECQKKSPISKSMGTLE NTFEGHKSKNKEDCDERDLLTVNRKIKISNLEKEQMLTSDFKKNTRLLPK LKKIENQVAMSFYKHQSSPDLSSEESETEKEIKRKAEVKKTKAGNTKEAV VHLRKSTRNTSNIPVILEPETEESENEFYIKQKKARPSVKETLQKSGVRK EFPITEAVGSDKTNRHPLECLPGLIQDKEWNEKELQKLHCAFASLPKHKP GFWSEVAAAVGSRSPEECQRKYMENPRGKGSQKHVTKKKPANSKGQNGKR GDADQKQTIKITAKVGTLKRKQQMREFLEQLPKDDHDDFFSTTPLQHQRI LLPSFQDSEDDDDILPNMDKNPTTPSSVIFPLVKTPQCQHVSPGMLGSIN RNDCDKYVFRMQKYHKSNGGIVWGNIKKKLVETDFSTPTPRRKTPFNTDL GENSGIGKLFTNAVESLDEEEKDYYFSNSDSA Simboli
C: Cistein D: Asparaginska kiselina E: Glutaminska kiselina F: Fenilalanin G: Glicin H: Histidin I: Izoleucin K: Lizin L: Leucin M: Metionin N: Asparagin P: Prolin Q: Glutamin R: Arginin S: Serin T: Treonin V: Valin W: Triptofan Y: Tirozin
Kloniranje i ekspresija Koristeći tečnu hromatografiju sa tandemskom masenom spektrometrijom, Fujita et al. (2007) identificirali su MIS18BP1 kao komponentu kompleksa MIS18 u ekstraktima HeLa ćelija. Protein MIS18BP1 sadrži Myb / SANT domenu koja može vezati DNA i ima izračunatu molekularnu masu od 129 kD. Identificirali su ortologe MIS18BP1 kod svih pregledanih kičmenjaka, ali ne i kod drugih eukariota, uključujući i S. pombe. Analiza imunofluorescencije otkrila je da je MIS18BP1 lokaliziran na centromernoj telofazi-G1 u transficiranim ćelijama HeLa.Fujita, Y., Hayashi, T., Kiyomitsu, T., Toyoda, Y., Kokubu, A., Obuse, C., Yanagida, M. Priming of centromere for CENP-A recruitment by human hMi18-alpha, hMis18-beta, and M18BP1. Dev. Cell 12: 17-30, 2007. PubMed: 17199038
Funkcija gena Koristeći masenu spektroskopiju, imunoprecipitaciju i 2– i 3-hibridne analize kvasca, Fujita et al. (2007) otkrili su da su ljudski MIS18-alfa, MIS18-beta i MIS18BP1 tvorili MIS18 kompleks. Analiza imunofluorescencije potvrdila je da su se sva tri proteina kolokalizirala u centromerama u HeLa ćelija, ovisano o ciklusu. Kolokalizacija se dogodila tokom mitotskog izlaza koji je započeo u anafazi/telofazi, a proteini su ostali povezani tokom rane G1-faze. Analiza nokdauna posredstvom RNK posredovanja u HeLa ćelijama pokazala je da je ljudski kompleks MIS18 presudan za poravnavanje metafaza i pravilnu segregaciju hromosoma. Centromerna lokalizacija tri proteina MIS18 bila je bitna za naknadno regrutovanje de novo sintetiziranog CENPA. Analiza mutacije otkrila je da je konzervirani motiv MIS18-alfa potreban za ispravnu lokalizaciju i funkciju proteina MIS18. Inhibicija histonskih deacetilaza poboljšala je regrutaciju novosintetiziranog CENPA u ćelijama osiromašenim MIS18 , oviso o dozi, pokazujući da je centromerni histon potrebno acetilirati prije taloženja CENPA na centromere. Pored toga, MIS18-alfa, MIS18-beta i MIS18BP1 međusobno su ovisili o lokalizaciji centromere. Nokdaun bilo kojeg od tri proteina MIS18 ukinuo je regrutaciju centromere novo sintetiziranog CENPA, praćeno defektima kao što su neusklađeni hromosomi, pogrešno anafazno razdvajanje i mikrofaze.
Analizom ekspresije u čelijama HeLa, Spiller et al. (2017) pokazali su da je N-terminalna regija MIS18BP1 dovoljna za direktnu interakciju s MIS18A-MIS18B da formira kompleks MIS18. Testiranje in vitro potvrdilo je da je MeDiY domen MIS18A, a ne MIS18B, direktno komunicirao sa N-terminalnom regijom MIS18BP1. Međutim, MIS18A-MIS18B MeDiY-ni heterodimer vezao je MIS18BP1 snažnije od samog MIS18A MeDiY, što ukazuje da MIS18A MeDiY ostvaruje dodatne kontakte s MIS18BP1, u prisustvu MIS18B MeDiY ili da MIS18B MeDiY jača vezivanje MIS18A MeDI1.Spiller, F., Medina-Pritchard, B., Abad, M. A., Wear, M. A., Molina, O., Earnshaw, W. C., Jeyaprakash, A. A. Molecular basis for Cdk1-regulated timing of Mis18 complex assembly and CENP-A deposition. EMBO Rep. 18: 894-905, 2017. PubMed: 28377371
Utvrdili da su četiri kopije MIS18A i dvijekopije MIS18B formirale heteroheksamer koji je povezao dvije kopije MIS18BP1, da bi se formirao heterooktamerni MIS18 kompleks. Heteroheksamer MIS18A-MIS18B sastavljen je od heterotrimera formiranih preko C-terminalnog alfa-heliksnih domena MIS18A i MIS18B, koji su zatim sastavljeni u heteroheksamer putem MeDiY interfejsa za dimerizaciju. Ovaj je takođe bio potreban za vezivanje dvije kopije MIS18BP1, da bi se formirao MIS18 hetero-oktamer i za taloženje CENPA na centromeri. Dva konsenzusna mjesta CDK1 fosforilacija unutar N-terminalne regije MIS18BP1 bila su direktno uključena u vezivanje MIS18A-MIS18B, što ukazuje na to da sklop MIS18 kompleksa i centromerna lokalizacija vjerovatno reguliraju CDK1 na način ovisan o [ćelijski ciklus|[ćelijskom ciklusu]].
Modelni organizmi + Fenotip Mis18bp1 nokaut-miša Svojstvo Fenotip Vijabilnost homozigota Nenormalno Studija recesivne letalnostiNenormalno Plodnost Normalno Tjelesna težina Normalno Test otvorenog polja: anksioznost Normalno Neurološka procjenaNormalno Snaga stiskaNormalno Test vruće ploče Normalno Dismorfologija Nenormalno Indirektna kalorimetrija Normalno Test tolerancije glukoze Normalno Slušni odgovor moždanog stabla Normalno DEXA Normalno Radiografija Normalno Tjelesna temperatura Normalno Morfologija oka Normalno Klinička hemija (nalaz)Normalno Plazmatski imunoglobulini Normalno Hematologija Normalno Leukociti periferne krvi Normalno Mikronukleus test Normalno Težina srca Normalno Histopatologija oka Normalno Salmonella infekcija Normalno Citrobacter infekcija NormalSvi testovi i analize su iz Mouse Resources Portal, Wellcome Trust Sanger Institute. U proučavanju PNPO funkcije, korišteni su modelni organizmi. Uvjetna linija nokaut-miševa, zvana Mis18bp1 generirana je kao dio programa Međunarosnog konzorcija za miševe – visokopropusnog projekta mutageneze za generiranje i distribuciju životinjskih modela bolesti zainteresiranim naučnicima.
Muške i ženske životinje prolazile su standardizirani fenotipski skrining, kako bi se utvrdili efekti delecije. Od 24 izvedena testa ina mutantnim miševima, uočene su tri značajne abnormalnosti. Tokom gestacije, nije utvrđen homozigotni mutantni embrion, pa tako nijedan nije preživio do odvikavanja. Preostali testovi su izvedeni na mutiranim heterozigotnim odraslim miševima; nisu opažene nikakve dodatne značajne abnormalnosti kod ovih životinja.
Reference
Dopunska literatura
Kategorija:Geni na hromosomu 14 Kategorija:Ljudski proteini Kategorija:Proteomika Kategorija:Mišji mutirani geni