thumb|Cryo-EM struktura procesivnog kompleksa PolD–PCNA vezanog za DNK Proliferirajući ćelijski jedarni antigen (PCNA) je DNK-stezaljka koja djeluje kao procesivni faktor za DNK-polimerazu δ u eukariotske ćelije i neophodan je za replikaciju. PCNA je homotrimer i svoju procesnost postiže okružujući DNK, gdje djeluje kao skela za regrutovanje proteina uključenih u replikaciju DNK, popravak DNK, remodeliranje hromatina i epigenetičke uticaje. Kod ljudi, genski lokus PCNA nalazi se na kratkom (p) kraku hromosoma 20.
Mnogi proteini stupaju u interakciju sa PCNA preko dva poznata PCNA-interagirajuća motiva PCNA-interaktivne peptidne (PIP) kutije i AlkB homolog 2 PCNA motiva u interakciji (APIM). Proteini koji se vezuju za PCNA preko PIP-kutije su uglavnom uključeni u replikaciju DNK, dok su proteini koji se vezuju za PCNA preko APIM-a uglavnom važni u kontekstu genotoksičnog stresa.
Funkcija
Protein koji je kodiran ovim genom nalazi se u jedru i kofaktor je delta DNK-polimeraza. Kodirani protein djeluje kao homotrimer i pomaže u povećanju procesivnosti sinteze vodećeg lanca tokom replikacije DNK. Kao odgovor na oštećenje DNK, ovaj protein je ubikvitinski uključen, kao i u RAD6-ovisni put popravk DNK. Za ovaj gen su pronađene dvije varijante transkripta koje kodiraju isti protein. Pseudogeni ovog gena su opisani na hromosomu 4 i na hromosomu X.
PCNA se također nalazi u arhejama, kao faktor procesivnosti polD, jedinstvene multifunkcionalne DNK-polimeraze u ovoj domeni života.
Ekspresija u jedru tokom sinteze DNK PCNA je prvobitno identifikovana kao antigen koji se eksprimira u ćelijskom jedru tokom faze sinteze DNK ćelijskog ciklusa. Dio proteina je sekvenciran i ta sekvenca je korištena da se omogući izolacija klona cDNK. PCNA pomaže u držanju DNK-polimeraze delta (Pol δ) na DNK. PCNA je stegnut koji je heteropentamerni član AAA+ klase ATPaza. Ekspresija PCNA je pod kontrolom kompleksa koji sadrže E2F transkripcijski faktor.
Uloga u popravku DNK Budući da je DNK-polimeraza epsilon uključena u resintezu izrezanih oštećenih lanaca DNK tokom popravka DNK, PCNA je važna i za sintezu DNK i za popravak DNK.
PCNA je također uključen u put tolerancije oštećenja DNK poznat kao replikacijski popravak (PRR). U PRR postoje dva potputa: (1) put translezije, koji se provodi specijaliziranim DNK-polimerazama koje su sposobne da inkorporiraju oštećene baze DNK u svoja aktivna mjesta (za razliku od normalne replikativne polimeraze, koja se zaustavlja), i time zaobilaze oštećenje, i (2) predloženi put "prebacivanja šablona" za koji se smatra da uključuje premoštavanje oštećenja angažovanjem mehanizma za homolognu rekombinaciju. PCNA je ključan za aktivaciju ovih puteva i izbor koji put će ćelija koristiti. PCNA postaje posttranslacijski modificiran pomoću ubikvitina. Monoubikvitin lizina broj 164 na PCNA aktivira put sinteze translezije. Smatra se da proširenje ovog monoubikvitina pomoću nekanonskog lanca poliubikvitina vezanog uz lizin-63 na PCNA aktivira put prebacivanja šablona. Nadalje, sumoilacija (pomoću malog modifikatora sličnog ubikvitinu, SUMO) PCNA lizina-164 (i u manjoj mjeri, lizina-127) inhibira put prebacivanja šablona. Ovaj antagonistički efekt nastaje jer sumoilirana PCNA regrutuje DNK-helikazu zvanu Srs2, koja ima ulogu u razbijanju Rad51 nukleoproteinskih filamenata koji su fundamentalni za iniciranje homologne rekombinacije.
PCNA-vezujući proteini PCNA stupa u interakciju s mnogim proteinima.
Apoptotski faktori ATPaza Enzimi popravka ekscizijom baza Regulatori ćelijskog ciklusa Faktor hromatinskog remodeliranja Utovarivač stezaljke Kohezin DNK-ligaza DNK-metiltransferaza DNK-polimeraza E2 SUMO-konjugirajući enzim E3 ubikvitin-ligaza Flap endonukleaza Helikaze Histon-acetiltransferaza Histonski šaperon Histon-deacetilaza Enzimi Popravak neusklađenosti Receptor NKp44 Enzim popravka ekscizijom nukleotida Poly ADP riboza polimeraza Prokaspaze Protein-kinaza Faktor licenciranja TCP proteinski domen Topoizomeraza
Interakcije
Pokazalo se da PCNA interraguje sa:
Annexin A2, CAF-1, CDC25C, CHTF18, Ciklin D1, Ciklin O, Ciklin-ovisna kinaza 4, Ciklin-ovisni inhibitor kinaze 1C, DNMT1, EP300, Uspostava kohezije sestrinskih hromatida 2, Zakrilna strukturno-specifična endonukleaza 1, GADD45A, GADD45G, HDAC1, HUS1, ING1, KCTD13, KIAA0101, Ku70, Ku80, MCL1, MSH3, MSH6, MUTYH, P21, POLD2, POLD3, POLDIP2, POLH, POLL, RFC1, RFC2, RFC3, RFC4, RFC5, Ubikvitin C ATP-ovisna helikaza Wernerovog sindroma, XRCC1, i Y-kutijski vezani protein 1.
Proteini koji komuniciraju sa PCNA preko APIM-a uključuju ljudski AlkB homolog 2, TFIIS-L, TFII-I, Rad51B, XPA, ZRANB3, and FBH1.
Upotreba Antitijela protiv proliferirajućeg ćelijskog jedarnog antigena (PCNA) ili monoklonsko antitijelo zvano Ki-67 može se koristiti za procjenu različitih neoplazmi, npr. astrocitoma. Mogu imati dijagnostičku i prognostičku vrijednost. Snimanje jedarne distribucije PCNA (putem označavanja antitijela) može se koristiti za razlikovanje između ranog, srednje i kasne S-faze ćelijskog ciklusa. Međutim, važno ograničenje antitijela je da ćelije moraju biti fiksirane što dovodi do potencijalnih artefakata.
S druge strane, proučavanje dinamike replikacije i popravke u živim ćelijama može se obaviti uvođenjem translacijskih fuzija PCNA. Da bi se eliminisala potreba za transfekcijama i zaobišao problem ćelija koje je teško transficirati i/ili kratko žive, mogu se koristiti markeri za replikaciju i/ili reparaciju permeabilnih ćelija. Ovi peptidi nude izrazitu prednost koja se može koristiti "in situ" u živom tkivu i čak razlikovati ćelije koje su podvrgnute replikaciji od ćelija koje su podvrgnute popravljanju..
PCNA je potencijalna terapijska meta u terapiji kancera.
Također pogledajte Ki-67 – ćelijski marker za proliferaciju Transkripcija
Reference
Dopunska literatura
Vanjski linkovi
Kategorija:Regulatori ćelijskog ciklusa Kategorija:Replikacija DNK Kategorija:Popravak DNK Kategorija:Proteini