Pridruženi protein 25 vakuolskog sortiranja je protein koji je kod ljudi kodiran genom VPS25. Patricia Hartz (2007) mapirala je gen VPS25 na hromosomu 17q21.3, na osnovu poravnanja VPS25 sekvence (GenBank AB014763) sa genomskom sekvencom (struktura 36.1).
Komponenta je kompleksa ESCRT-II povezanog s endosomnim kompleksima za sortiranje potrebno za transportni protein II. ESCRT (ESCRT-I, -II, -III) kompleksi usaglašavaju efikasno sortiranje ubikvitinskih transmembranskih receptora do lizosoma, putem multivezikulskih tijela (MVBs). ESCRT-II recruits the transport machinery for protein sorting at MVB. Pored toga, pokazano je da ljudski ESCRT-II tvori kompleks sa RNK-polimeraznim II faktorom elongacije ELL kako bi izvršio transkripciju kontrolne aktivnosti. ESCRT-II se privremeno povezuje sa endosomnom membranom i na taj način inicira formiranje ESCRT-III, membranom povezanog proteinskog kompleksa, koji funkcionira neposredno nizvodno od ESCRT-II tokom sortiranja MVB tereta. ESCRT-II zauzvrat funkcionira nizvodno od ESCRT-I, proteinskog kompleksa koji se veže za ubikvitinizirani endosomski teret.
ESCRT-II je trorežnjeviti kompleks koji se sastoji od dvije kopije vps25, jedne kopije vps22 i C-terminalne regije vps36. Kristalna struktura vps25 otkrila je dvija domena upredenih zavojnica N-terminalnog domens vps25 u interakciji s vps22 i vps36.
Dužina polipeptidnog lanca je 176 aminokiselina, a molekulska težina 20 748 Da-
Aminokiselinska sekvenca 1020304050 MAMSFEWPWQYRFPPFFTLQPNVDTRQKQLAAWCSLVLSFCRLHKQSSMT VMEAQESPLFNNVKLQRKLPVESIQIVLEELRKKGNLEWLDKSKSSFLIM WRRPEEWGKLIYQWVSRSGQNNSVFTLYELTNGEDTEDEEFHGLDEATLL RALQALQQEHKAEIITVSDGRGVKFF Simboli
C: Cistein D: Asparaginska kiselina E: Glutaminska kiselina F: Fenilalanin G: Glicin H: Histidin I: Izoleucin K: Lizin L: Leucin M: Metionin N: Asparagin P: Prolin Q: Glutamin R: Arginin S: Serin T: Treonin V: Valin W: Triptofan Y: Tirozin
Kloniranje i ekspresija VPS25, VPS36 i SNF8 formiraju ESCRT-II (endosomni kompleks za sortiranje potreban za transport II), kompleks koji je uključen u endocitozu ubikvitiniranih membranskih proteina. VPS25, VPS36 i SNF8 također su povezani u multiproteinskom kompleksu sa faktorom elongacije RNK-polimeraze II (ELL) (Slagsvold et al., 2005; Kamura et al., 2001).
Kamura et al. (2001) pročistili su kompleks koji sadrži Ell iz ekstrakata jetre pacova, pa sekvenciranjem peptida i analizom baze podataka identificirali su mišaji i ljudski VPS25, koji su nazvali EAP20. Izvedeni proteini miša i čovjeka sadrže 176 aminokiselina, izračunatee molekulske mase od 21 kD i identični su.
Koristeći mišje proteine eksprimirane u ćelijama sisara i insekata, otkrili su da se Eap30 (SNF8) i Eap20 mogu koimunoprecipitirati u odsustvu Eap45 (VPS36), a da se Eap20 i Eap45 mogu koimunoprecipitirati u odsustvu Eap30. Međutim, mali Eap30 koimunoprecipitiran je sa Eap45 u odsustvu Eap20. Zaključili su da EAP20 premošćuje EAP30 i EAP45 i time nukleira sklop EAP kompleksa.
Koimunoprecipitacijom proteina označenih epitopom eksprimiranom u ćelijama HEK293, Yorikawa et al. (2005) pokazali su da je CHMP6 u interakciji s CHMP4B (610897) i EAP20. In vitro padajući testovi koji koriste rekombinantne proteine, pokazali su direktnu fizičku interakciju posredovanu N-terminalnom osnovnom polovinom CHMP6. EAP20 označen epitopom se lokalizira difuzno u transficiranim HeLa ćelijama, ali je pokazivao tačku distribuciju kada se koeksprimira sa CHMP6.Kamura, T., Burian, D., Khalili, H., Schmidt, S. L., Sato, S., Liu, W.-J., Conrad, M. N., Conaway, R. C., Conaway, J. W., Shilatifard, A. Cloning and characterization of ELL-associated proteins EAP45 and EAP20: a role for yeast EAP-like proteins in regulation of gene expression by glucose. J. Biol. Chem. 276: 16528-16533, 2001. PubMed: 11278625Slagsvold, T., Aasland, R., Hirano, S., Bache, K. G., Raiborg, C., Trambaiolo, D., Wakatsuki, S., Stenmark, H. Eap45 in mammalian ESCRT-II binds ubiquitin via a phosphoinositide-interacting GLUE domain. J. Biol. Chem. 280: 19600-19606, 2005. [PubMed[: 15755741Yorikawa, C., Shibata, H., Waguri, S., Hatta, K., Horii, M., Katoh, K., Kobayashi, T., Uchiyama, Y., Maki, M. Human CHMP6, a myristoylated ESCRT-III protein, interacts directly with an ESCRT-II component EAP20 and regulates endosomal cargo sorting. Biochem. J. 387: 17-26, 2005. [PubMed[: 15511219
Reference
Dopunska literatura
Kategorija:Proteinske porodice Kategorija:Geni na hromosomu 17 Kategorija:Ljudski proteini Kategorija:Proteomika